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實用干貨 | 如何進行細胞計數(shù)實驗?

更新時間:2023-06-05瀏覽:1556次

細胞計數(shù)是細胞培養(yǎng)過程中的重要步驟,“傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方法"是在顯微鏡下使用血細胞計數(shù)板人工計數(shù)。這里博大博聚為大家介紹下傳統(tǒng)細胞計數(shù)的詳細的步驟,供大家參考。


1、準備好血細胞計數(shù)板

1)     先用無水乙醇清潔血細胞計數(shù)板表面和蓋玻片;

2)     再用純水清潔血細胞計數(shù)板表面和蓋玻片;

3)     每次清洗后用洗耳球吹干。

4)     在血細胞計數(shù)板的計數(shù)池上方蓋上專用的蓋玻片。

注意:最好不要擦拭血細胞計數(shù)板的計數(shù)池,防止標識線損壞。


2、制備細胞懸液

1)     貼壁生長的細胞,使用胰酶消化的方法使細胞從培養(yǎng)瓶表面脫落;

2)     漩渦混勻或使用移液器反復(fù)吹吸細胞懸液,盡量減少細胞團簇;

3)     懸浮細胞則可以直接進行取樣計數(shù);

4)     細胞懸液濃度控制在1×106個細胞/mL左右。

注意:

a)      盡量少、盡量小的細胞團簇;

b)     如需計算活率,則需將細胞懸液按照1:1的比例加入等量的0.4%的臺盼藍染料,混勻后,靜置1~2分鐘。    



3、細胞加樣

1)     移液器輕吹細胞懸液使其混合均勻;

2)     將細胞懸液與臺盼藍染料按1:1體積混合均勻;

3)     取出10uL細胞懸液,將細胞懸液滴加于血細胞計數(shù)板邊緣凹槽處,此時液滴將在虹吸的作用下進入蓋玻片下方的計數(shù)池。

加樣-示意圖.jpg


注意:                                              

1)     每次加樣前要混勻細胞懸液,防止細胞沉降造成取樣誤差增大;

2)     加樣過程中,要一次性將細胞懸液注入計數(shù)室,防止氣泡產(chǎn)生,否則要重做;

3)     加樣時不要將細胞懸液直接吹入計數(shù)池,會造成細胞分布不均勻。



4、 人工細胞計數(shù)

計數(shù)工具:10X物鏡的顯微鏡、血細胞計數(shù)板。

1)     加樣后,將血細胞計數(shù)板靜置數(shù)分鐘;

2)     把血細胞計數(shù)板放置在顯微鏡的載物臺進行觀察-計數(shù)-記錄;

3)     分別計數(shù)大方格1-2-3-4中的細胞總數(shù)。

血細胞計數(shù)板-示意圖.jpg


注意:

1)     計數(shù)時建議重復(fù)1-2次,取平均值,減小計數(shù)誤差;

2)     四個區(qū)域的細胞數(shù)量偏差不應(yīng)超過 5%,否則要重新加樣。

3)     對橫跨刻度上的細胞,依照“數(shù)上不數(shù)下,數(shù)左不數(shù)右"的原則進行計數(shù)。

4)    為降低細胞計數(shù)誤差,濃度最好控制在1×106個細胞/mL左右;

5)     計數(shù)時,只計數(shù)完整的細胞,如有聚團細胞則按一個細胞進行計數(shù)。


5、 血細胞計數(shù)板濃度計數(shù)標準

(中國的標準:JJG 552-1988血細胞計數(shù)板試行檢定規(guī)程)

細胞計數(shù)區(qū)域濃度示意圖.jpg

1)     如上圖所示,當血細胞計數(shù)板放上蓋玻片后,平臺與蓋玻片之間的距離 (即高度)為 0.1mm;

2)     平臺中心部分各以3mm長,3mm寬精確劃分為9個大方格,稱為計數(shù)室,每個大方格面積為1mm2,體積為 0.1mm3;

3)     細胞濃度 (mL)=(四個大方格細胞數(shù)之和)/4X2(染液稀釋倍數(shù))X 104=?個細胞/mL。


注意:如果不加入臺盼藍染料,則無需乘以2。

 

相信有些小伙伴,即使花費很長時間熟悉,并實際接觸細胞計數(shù)操作的全部流程后,還是會有結(jié)果不滿意、人工操作效率低、結(jié)果無法一目了然、細胞計數(shù)數(shù)到“眼疼"的情況。

在這里,我向大家推薦一款博大博聚自主研發(fā)的、可以使用標準的血細胞計數(shù)板的全自動細胞計數(shù)儀!


6、全自動細胞計數(shù)儀——JSY-SC-031N型

細胞計數(shù)儀-細胞計數(shù)板.jpg

全自動細胞計數(shù)儀(JSY-SC-031N型)是一款一體式明場細胞計數(shù)儀,內(nèi)置10X光學放大系統(tǒng)、全自動調(diào)焦裝置、精密的X、Y、Z三軸聯(lián)動平臺、強大的細胞識別算法。

儀器使用標準的血細胞計數(shù)板,可實時預(yù)覽細胞圖像,將傳統(tǒng)的細胞計數(shù)方式可視化、自動化、智能化,為您呈現(xiàn)真實可信的實驗結(jié)果。


7、血細胞計數(shù)板上機實拍圖案例

案例1-球藻細胞圖.jpg案例3-昆蟲細胞圖.jpg

案例4-BHK細胞.jpg

8、細胞計數(shù)結(jié)果包括

總細胞濃度、活/死細胞濃度、活/死細胞比率、總細胞聚團率/濃度、活細胞聚團率/濃度、死細胞聚團率/濃度等計數(shù)結(jié)果、原始圖片、識別圖片、柱狀圖、散點圖、等高線圖、報告單等…


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